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¿Cómo escoges los clones?
¿Cómo escoges los clones?

Video: ¿Cómo escoges los clones?

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Anonim

Cuando elegir a clon , asegúrese de que las raíces sean fuertes, blancas y sobresalgan ansiosamente del medio de cultivo. Si las raíces están marrones y arrugadas, o si parecen inactivas, déjelas de nuevo y busque una mejor.

Además, ¿cómo se clona una sola célula?

  1. Cuente las células para colocar ~ 16 000 células en el primer pocillo (A1) de una placa de 96 pocillos que contiene 200 µL de medio.
  2. Retire 100 µL de las células que contienen A1 y mezcle con B1, pipeteando hacia arriba y hacia abajo 3 veces para mezclar bien antes de retirar 100 µL y mezclar con C1, etc.

Además, ¿cómo se elige una colonia de células de mamíferos? Coloque la placa bajo el microscopio para seleccionar sanos indiferenciados colonias . Elija colonias utilizando una pipeta P-20 ajustada a 10 ul. Con cuidado elegir a colonia sin romper el colonia en soltero células y transfiéralo a una placa de 96 pocillos con tripsina. Pipetee hacia arriba y hacia abajo un par de veces para dispersar el colonia.

En consecuencia, ¿cómo se usa un cilindro de clonación?

Utilizando pinzas medianas estériles, coja un cilindro de clonación . Presione suavemente la parte inferior plana del cilindro en la grasa de silicona suave y quitar con un movimiento vertical repentino. Si se hace correctamente, esto dará una distribución uniforme de la grasa en la parte inferior de la cilindro . Selecciona el cilindro sobre una colonia.

¿Cómo eliges colonias para líneas celulares estables?

El protocolo para generar líneas celulares estables requiere varios pasos como se muestra a continuación:

  1. Genere una curva de muerte para determinar la concentración de antibiótico de selección óptima.
  2. Transfectar células con las construcciones de plásmido deseadas
  3. Seleccionar y expandir colonias policlonales estables.
  4. Identificar clones individuales mediante dilución y expansión limitadas.

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