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Video: ¿Por qué es necesario purificar los productos de la PCR antes de la secuenciación?
2024 Autor: Stanley Ellington | [email protected]. Última modificación: 2023-12-16 00:15
Verificación del deseado producto es esencial , que incluye la confirmación de la falta de datos no específicos productos y dímeros de cebadores. Limpio de la mezcla de reacción también es necesario para eliminar cebadores no incorporados y dNTP que pueden interferir con reacciones posteriores y dar lugar a una secuencia ilegible.
Además, ¿por qué es necesario purificar los productos de PCR?
Necesitas purificar productos de PCR para deshacerse de los cebadores, nucleótidos y enzimas no utilizados con el fin de optimizar el éxito de la ligadura, que mantendrá y secuenciará la producto de PCR . Para purificar los Productos de PCR , se utiliza cromatografía de exclusión por tamaño.
También se puede preguntar, ¿debería purificar los productos de la PCR antes de la digestión con endonucleasas de restricción? La mayoría de restricción las enzimas son activas en PCR tampones. Para aplicaciones de clonación, purificación de Productos de PCR antes de la digestión es necesario para eliminar la ADN polimerasa termófila activa presente en el PCR mezcla. Las ADN polimerasas pueden alterar los extremos del ADN escindido y reducir el rendimiento de la ligadura.
La gente también pregunta, ¿cómo se preparan los productos de PCR para la secuenciación?
Secuenciación directa de productos de PCR
- ASEGÚRESE de amplificar el fragmento correcto.
- Debe eliminar todos los cebadores de PCR residuales y los nucleótidos no incorporados.
- Si los cebadores de PCR también serán los cebadores de secuenciación, asegúrese de que coincidan con nuestras condiciones.
- ¡No concentre demasiado la muestra!
¿Puede secuenciar el producto de PCR?
Directo Secuenciación de Productos de PCR . Secuenciación utiliza solo uno imprimación en lugar de las dos utilizadas en PCR . Si lo haces no quitar ambos cebadores, Vas a conseguir dos secuencias superpuestos entre sí que no son legibles. Está bien usar un PCR imprimación para secuenciación siempre que coincida con nuestras condiciones.
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